產品介紹

超微量核酸定量光譜儀
NanoDrop

NanoDrop 2000
說明

一、簡介
NanoDrop 2000超微量分光光度計是NanoDrop的最新產品,應用液體的表面張力特性,樣品體積只需要 0.5~2ul,在偵測台上,經上下臂的接觸拉出固定的光徑達到快速、微量、高濃度、免石英管、免毛細管等耗材偵測吸收值的優點。此產品設計受專利保護,並在全世界廣受歡迎,其準確度與便利性讓科學家得以更有效率進行各項研究,參考網頁連結
)。

NanoDrop 2000使用高能量氙燈(pulsed xenon flash lamp)可提供190~840nm的全光譜偵測,且不需要暖機,開機後立即使用。搭配高感度CCD array偵測器,偵測吸收值可高達300Abs(dsDNA濃度2~15000ng/ul),大部分純化後的核酸幾乎都不需要稀釋即可偵測。

待測樣品的均質性是NanoDrop 2000的最高要求,一般核酸、蛋白質樣品能在偵測前以vortex mixer震勻為最佳,若無vortex mixer也應以pipette吸放數次混勻。若擔心genomic DNA可能因前述動作而斷裂,則改以55゚C加熱約一分鐘,使樣品在偵測前呈現均勻狀態,以確保 2ul 具有代表性。

偵測時選擇不同偵測模式,可以得到最快速的結果:
● Nucleic Acid – 吸收光譜、230nm, 260nm, 280nm吸收值(換算成10mm光徑吸收值)、260/280 ratio、260/230 ratio及核酸濃度。

● UV-Vis – 190~840nm間所有波長的吸收值及光譜(以1mm光徑吸收值呈現)。

● A280蛋白質定量法 – 280nm吸收值(換算成10mm光徑吸收值)、260/280 ratio及蛋白質濃度。僅適用於純化後的蛋白質,須具有已知的質量消光係數(mass extinction coefficient)方可計算。

● BCA、Bradford及Lowry – 依不同呈色劑提供不同波長吸收值結果,自動畫出標準曲線並計算R square,待測蛋白質濃度。

* 蛋白質偵測模式目前提供BCA、Bradford及Lowry三種常見定量呈色劑,因呈色劑隨時間會逐漸加深,使用前請詳閱試劑說明書並製備不同濃度的標準品,在最佳時間內完成偵測,以得到良好的標準曲線。每個標準曲線最多可有七個標準品,每個標準品最多可做五重複。

* 測蛋白質時樣品體積需使用 2ul,每個樣品偵測後需以labwipe 擦拭15~20回,以避免呈色劑與蛋白質的殘留。觀看影片

濃度範圍:

樣品種類

最低濃度

最高濃度

(超過時請稀釋樣品)

再現性 (五重複以上)

核酸

2 ng/ul

15000 ng/ul (dsDNA)

12000 ng/ul (RNA)

濃度範圍在 2-100 ng/ul 時,SD ± 2 ng/ul

濃度範圍大於 100 ng/ul 時,CV ± 2%

BSA

0.10 mg/ml

100 mg/ml

濃度範圍在 0.05-10 mg/ml 時,SD ± 0.10 mg/ml

濃度大於 10 mg/ml 時,CV ± 2%

蛋白質,以BCA方式定量

0.2 mg/ml

8.0 mg/ml

CV± 2% (在可偵測的濃度範圍內皆然)

蛋白質,以modified Lowry方式定量

0.2 mg/ml

4.0 mg/ml

CV± 2% (在可偵測的濃度範圍內皆然)

蛋白質,以Bradford方式定量

100 ug/ml

8000 ug/ml

濃度範圍在 100-500 ug/ml 時,SD ± 25 ug/ml

濃度大於 500 ug/ml 時,CV ± 5%

蛋白質,以Mini Bradford方式定量

15 ug/ml

100 ug/ml

濃度範圍在 15-50 ug/ml 時,SD ± 4 ug/ml

濃度大於 50 ug/ml 時,CV ± 5%




二、使用方法舉例
dsDNA:
在主畫面點選Nucleic Acid,電腦與儀器自動完成連線。依照DNA所溶於之液體準備該溶液(務必確認DNA溶於二次水、TE buffer或哪一組kit的elution buffer)取出1.5 ul 點在偵測台上,放下上臂後再按Blank。在右上方拉選Sample Type 選 DNA-50,在Sample ID位置輸入樣品名稱,將樣品混勻,取出1.5 ul 點在偵測台上,放下上臂後再按Measure。點此觀看操作影片


結果:




DNA濃度即以 9.691 x 50 = 484.5 算出。 260/280介於1.8~2.0通常代表此為較純的DNA(隨DNA組成不同會有差異)。 260/230高於260/280,介於1.8~2.2通常表示純化過程殘留污染物較少。若欲察看220~340nm間其他波長的吸收值,可使用滑鼠拉動位於230nm的直線,或在右邊λ處輸入其他波長數值。



三、結果整理:
NanoDrop2000 軟體在偵測一開始會詢問檔案欲存至何處,若未指定,則檔案會存在上一個使用者的檔案內。點此觀看或下載 Data 功能使用說明



四、注意事項:
1. 偵測後立即使用拭鏡紙(Kimwipe類)擦拭台面。先取一張將上下台面的液體吸走,再將此laboratory wipe吸過樣品的面反折到內部,折疊四次後以單方向多次擦拭台面(DNA 擦 5次,Protein 擦 20次)。

2. 同一滴液體只能做一次偵測,欲重複定量同一樣品,請擦掉前一滴,重新取出一滴進行偵測。

3. 基本上核酸樣品可使用1~2ul做測量,隨各液體體積特性之不同會有不同體積需求,原則上不超過 2ul。並請使用2ul pipette避免體積不足導致液柱無法完整形成。唯蛋白質樣品因呈色劑與蛋白質本身特性,務必使用2ul進行偵測。

4. 當軟體跳出錯誤訊息時,請詳細閱讀並依指示進行障礙排除。最常發生的情形是在偵測過程液柱並未正確形成,軟體會出現以下訊息。可先用肉眼觀察液柱是否未完整連接上下台面,或樣品內有泡泡,將上臂拉起後,擦掉該滴樣品,再重新進行偵測,必要時可將樣品體積加大至2ul。



正確的液柱應為:



5. 不可使用含有Hydrofluoric Acid (HF)之樣品,其他無腐蝕性之液體皆可使用。



五、日常與定期維護:

1.平時保持台面及儀器本身清潔。

2.定期校正。


常見問題:
問 1. 使用多少液體做測量?
答 1. 2ul,基本上可使用 0.5~2ul 做測量,隨各液體體積特性之不同會有不同體積需求,原則上不超過 2ul。並請使用2ul pipette 避免體積不足導致液柱無法完整形成。

問 2. 如何清潔台座?
答2. 使用 laboratory wipe 將上下座的液體吸走,再將此 laboratory wipe 吸過樣品的面反折到內部,折疊四次後以單方向多次擦拭台面(DNA 擦 5次,Protein 擦 20次)。點此觀看清潔台座影片


問3. 儀器多久需要校正?
答3. 每台儀器出廠前皆經過多次測試,並附上測試報告。新機一年校正一次,之後建議每半年再進行一次校正。本公司備有一年兩次的校正合約,以原廠標準程序進行定期校正。若有特殊狀況亦可個案處理。

問4. 燈源多久需要更換?
答4.一般而言儀器內一個氙氣燈可偵測 350萬個樣品,依供電及實驗室環境會有些微差異。若儀器在初始化時反覆出現錯誤訊息,請進入Diagnostics內進行燈源強度確認,若看不見任何光譜,即為燈源壽終之訊息。


其他常見問題



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