什麼是組織透明化？

組織含有常見色素(pigments) 的存在，例如：血紅蛋白(hemoglobin)、黑色素(melanin)和脂褐素(lipofuscin)，它們會有吸收光與自體螢光的特性。所以進行拍攝三維（3D）影像時，需將組織進行去色素及去脂化，減少組織對光的吸收及散射，讓光能夠均勻的穿透組織內部激發螢光訊號，進而觀察有興趣的蛋白質訊號或是結構。然而，生物組織具有不同的分子組成，使得組織透明化必須根據每種組織特性尋找合適的試劑及方法學。 每種方法學都有其優勢及劣勢，導致進行實驗時必須耗費許多時間測試條件，某些透明化試劑甚至是有毒物質，增加實驗人員的風險及實驗室的毒物管理成本。

From Hollow Tissue To Hollow Mice

MACS Clearing Kit 實現了對不同組織進行免疫染色和透明化，以便進行後續的三維（3D）成像分析。MACS Clearing Kit已根據不同的樣品，制定了整套工作流程，可以輕鬆、快速和有效地對不同組織進行免疫染色和透明化，例如：小鼠腦半球、腫瘤組織及類器官……等(詳如參考資料)。組織經過透明化後，可以使用不同的顯微鏡系統進行組織分析，例如：層光顯微鏡、共軛焦顯微鏡或雙光子顯微鏡。

工作流程透明化，簡單容易好上手

 使用MACS® Clearing Kit進行三維成像的步驟，其時間長短取決於具體的組織和樣本性質。一般的過程包括以下步驟：

固定和穿透處理： 這一步包括對組織樣本進行固定，使其對抗體變得可滲透。固定和穿透處理的時間可能會有所不同，但通常進行數小時至過夜。

免疫染色： 免疫染色的時間取決於使用的抗體種類或是組織，耗費時間可能從數小時到過夜。抗體可使用已接上螢光的抗體，孵育時間相對於間接免疫染色(需用二抗)會縮短許多。MACS REAfinity Antibody提供了各種螢光共軛種類的抗體，突變的Fc Region減少了背景訊號，無需進行FcR阻斷步驟，大幅了減少抗體的孵育時間。此外，它們全部屬於相同的IgG1同型抗體，因此需要較少的Isotype Control。

脫水處理： 免疫染色後會使用一系列乙醇稀釋使組織脫水。

透明化處理： 在脫水後，對組織進行處理，使其變得透明。

成像： 組織透明化後，就可以使用MACS Imaging Solution (無毒性有機溶液，折射率：1.556-1.562)在不同的顯微鏡系統中進行分析，如：層光顯微鏡、共軛焦顯微鏡或雙光子顯微鏡。

產品特色：

• 無毒且簡單：任何人都能執行的透明化方法。
• 快速而有效：一個迅速的透明化步驟，能夠最佳地清除樣品內的色素及脂質並保持組織形態。
• 多功能：適用於清除各種整個器官，包括小鼠腦和腫瘤組織。

• 清晰的影像：無毒的MACS Imaging Solution，與透明化組織的折射率匹配，允許無像差的影像獲取。

The MACS® Clearing Kit enables the immunostaining and clearing of different tissues for their subsequent three dimensional (3D) imaging analysis. Specific protocols have been developed using the MACS® Clearing Kit for the easy, fast and effective immunostaining and clearing of different tissues, such as mouse brain hemispheres, cerebral organoids, and human tumors. After clearing, tissues can be analyzed using different microscopy systems, such as light sheet fluorescence microscopy, confocal or two-photon microscopy.