MACS® Technology: One portfolio for all your cell isolation needs

MACS® 的技術是根據細胞表面抗原進行磁性分離，利用專一性抗體與超顺磁珠共軛結合來標記細胞表位，得以迅速且溫和的方式從 PBMC、組織、腫瘤或全血樣本中 ，獲取目標細胞，並分離出具有活力和功能性的細胞。MACS 技術系列提供多樣化選項，幾乎可分離出任何細胞型態，讓您自由選擇最適合您細胞及需求的分選方式。我們的產品系列在基礎和臨床研究中都提供穩定可靠的細胞分選方案。使用 MACS 技術，您能確信自己選擇了最佳的細胞分選方式。

(根據樣品來源為全血液樣品或是經過分離的單顆細胞及組織，可選擇陽性或陰性的分選方式進行分選, MACS 磁珠分選產品分類)

MACS® MicroBeads

MACS® 磁珠技術的長期成功歸因於將納米級超顺磁性微珠與 MACS column中強磁場的巧妙結合，僅有這項技術能確保對目標細胞最低程度的標記，並保持細胞特性，不會活化細胞。使用 MACS 微珠進行細胞分選只需三個簡單步驟：磁性標記、磁性分選和最後elution標記的細胞(圖1)。

(簡單3步驟: 磁性標記→磁性分選→elution MicroBeads , MicroBeads 圖1細胞分選步驟)

MACS® Columns: maximal magnetic power for minimal cell labeling

MACS® 磁珠技術的核心是 MACS Column，其是由覆蓋著cell-friendly coating的鐵磁球所組成的基質，當Column放置於 MACS 分離器中時，這些球體會將磁場放大 10,000 倍，因此在Column內產生強大的磁力。這種磁場能高效保留被標記上磁珠的細胞。

MACS® Column內寬敞的基質確保未被標記的細胞能夠輕鬆流過，而最小程度被標記的細胞（圖 2）則溫和且有效地保留在Column中（圖 3）。這減少了對細胞的壓力，並允許有效洗滌，同時防止細胞凝聚。

(若不使用 MACS® Column，則需要大量標記或大磁珠以確保維持足夠的磁性。 僅當使用 MACS® Column時，磁力的放大才能確保，在使用磁珠最小標記的情況下能有效保留細胞, 圖2 MACS® Column優勢)

(細胞在柱內球體之間自由移動，唯有磁力能保留細胞, 圖3 MACS® Column)

MACS^® Cell separation strategy

• Positive cell selection: MACS® MicroBeads and MicroBead Kits

Positive selection可通過直接或間接的方式進行標記，主要是指特定的目標細胞類型被磁珠標記。在分離過程中，磁珠標記的細胞被保留在Column內，而未標記的細胞則流過。經過洗滌步驟後，Column從分離器的磁場中移除，並從Column中elution目標細胞。另外由於MACS® Column中產生的強大磁場，可以使磁珠對目標細胞進行最小程度的標記，這確保了表位有足夠的空間進行後續的螢光染色和流式細胞儀分析。此外，低標記濃度和 微小的MACS® 磁珠尺寸不會活化目標細胞（見圖 4）。

優點:   • 最不侵入性的正向篩選方式

• 保留細胞功能性的最佳標記
• 生物可分解：標記細胞可用於下游應用

(使用 MACS CD19 MicroBeads或另一製造商column-free正向篩選方法富集人類 B 細胞。隨後，在有或無 B 細胞刺激試劑 CD40-Ligand/Anti-His antibody 和 IL-4 情況下培養細胞 7 天。利用流式細胞儀直接測量細胞分離後及培養有無刺激試劑情況下的激活標記物（CD69、CD80 和 CD86）。MACS 磁珠未改變目標細胞狀態，而column-free方法在缺乏刺激試劑時活化了 B 細胞。, 圖4對於特定標記的目標細胞進行Straightforward positive selection)

• Untouched cell isolation : MACS® Cell Isolation Kits

Untouched cell isolation是以未標記、即未受影響的方式分離特定的目標細胞類型，而非目標細胞被磁性標記並消除。

在分離過程中，未標記的目標細胞類型被收集起來，磁性標記的非目標細胞混合物則被保留在Column中。

MACS® Cell Isolation Kits包含標定抗體和 MACS® 磁珠的混合物，使用間接磁性標記（見圖 5）。如果不希望抗體與目標細胞結合，則這些套Kit會是首選。其最小程度的使用 MACS® 磁珠，對不需要的細胞進行標記，避免對目標細胞的非特異性標記，確保目標細胞完全未受影響（見圖 6）。相比之下，其他製造商基於納米級珠子的column-free方法需要高濃度的標記試劑，導致目標細胞部分非特異性標記。

優點: 

• 高純度和回收率
• 完全兼容任何後續應用

沒有對目標細胞的非特異性標記(非目標細胞被磁性標記並消除。在分離過程中，未被標記的目標細胞類型流過Column被收集起來，而被標記的非目標細胞則保留在Column內。, 圖5 Untouched isolation: MACS® Cell Isolation Kits)(利用 (A) MACS Monocyte Isolation Kit II, human 或 (B) 另一製造商提供的column-free人類單核細胞分離套件，通過消除不需要的細胞來豐富單核細胞。分離後對單核細胞（紅色）和納米級磁珠（綠色）進行染色顯示，使用column-free Kit時，目標細胞呈現非特異性標記，而MACS技術提供了真正未受影響的細胞。, 圖 6 MACS 技術達到真正的label-free)

• Sequential cell isolation

採用兩個連續分離步驟的組合來分離細胞亞群，這些細胞亞群可以通過它們對兩種不同標記的表現與其他細胞類型有所區別。

1.消除後正向篩選

如果不需要的細胞和目標細胞有一個共同標記，則此分離策略會很有用。在這種情況下，使用該標記無法在單一的正向篩選步驟中分離目標細胞。因此，先通過與共同標記不同的抗原，對不需要的細胞進行磁性標記並將其消除。之後分離過程中，流過column的細胞，隨後使用能結合共同標記的 MACS 磁珠進行標記，最後通過正向篩選來分離目標細胞。

(先消除非目標細胞，在進行正向篩選來分選出目標細胞,Sequential cell isolation)

2.正向篩選後，將標記和磁珠移除，再進行第二次正向篩選

REAlease™ 微珠技術為細胞分離提供了極大的靈活性。它允許通過對目標細胞進行正向篩選並從細胞中去除任何磁珠和標記來進行磁性細胞分離。接著，這些細胞可以進行進一步的分離步驟。

REAlease™ 磁珠技術原理

該技術依賴於重組工程的抗體片段，而不是抗體來標記特定的細胞表面標記物。這些抗體片段對細胞表位具有較低的親和力。但是，當這些片段被聚合形成複合物時，它們與目標細胞上的表位以高親和力結合，從而實現有效的磁性細胞分離。REAlease™ 技術可以控制片段的單一或聚合物狀態，從而在分離後觸發細胞表面釋放單體化的抗體片段。最終，經過正向篩選分離的目標細胞不含抗體片段和磁性標記，因此可用於進一步的分離步驟。當然，此分離步驟中的未標記的細胞亦可用於後續的正向篩選分離。

(細胞分選完後，可以完全移除細胞表面上的結合物，獲得無標記細胞 ,REAlease MicroBead Technology)

3. 兩次連續的正向篩選

MACS MultiSort 磁珠兩次連續的正向篩選步驟，進行兩個不同的標記，來分離細胞亞群。首先使用針對第一個標記的 MACS MultiSort 磁珠進行第一次正向篩選。在分離後，細胞與 MultiSort Release Reagent 反應，則該試劑可以將 MultiSort 磁珠從細胞上去除。接著對目標細胞進行第二次磁性標記，使用針對第二個標記的 MACS 磁珠，再進行正向篩選。

(MACS MultiSort MicroBeads 可以進行連續性的正向分選，此系列磁珠提供MultiSort release reagent , 讓磁珠從抗體上去除，得到不帶磁珠的細胞，後續再用第二種抗原的磁珠抗體去分選細胞。,Sequential sorting: two subsequent positive selections)

• MACS^® MicroBead

MACS® MicroBeads are 50-nm superparamagnetic particles that are conjugated to highly specific antibodies against a particular cell surface antigen. Due to their small size, the beads do not activate cells. Furthermore, MACS MicroBeads do not have to be removed for any downstream application.

• MACS^® Columns

At the heart of MACS® MicroBead Technology is the MACS Column, containing a matrix composed of ferromagnetic spheres covered with a cell-friendly coating.

When the column is placed in a MACS Separator, the spheres amplify the magnetic field by 10,000-fold, thus inducing a strong magnetic force within the column. The magnetic field efficiently retains cells labeled with the small, nano-sized beads.